双酚A免疫亲和柱说明书

使用对象

双酚A亲和柱能够特异性的纯化样品中的双酚A和双酚S，它采用了柱状琼脂糖凝胶作为固相载体，琼脂糖凝胶与双酚A抗体偶联形成免疫吸附剂，装柱制成免疫亲和柱。它能够特异性的纯化样品中的双酚A。双酚A亲和柱广泛地应用于食品和饮料等样品的提取，该方法速度快、操作简单、准确性高，对提高食品的质量和安全性起到十分重要的作用。

该说明书方法应用亲和柱方法检测食品中双酚A的检测方法。

GB 5009.305-2025 食品安全国家标准　食品中双酚A、双酚F和双酚S的测定

 

储存条件

该亲和柱保存在2-8 °C条件下，绝对不能冷冻，保质期为18个月。建议在室温（18-30°C）下使用。

 

实验溶液制备

• 甲醇-水溶液(80+20):量取甲醇80mL,加入水20mL,混匀。
• 甲醇-水溶液(40+60):量取甲醇40mL,加入水60mL,混匀。
• 盐酸溶液(10+90):量取10mL浓盐酸，加入90mL水中，混匀。
• PBS溶液：将PBS缓冲液试剂包（货号：G3001）用1000mL纯水溶解，混匀。

 

分析步骤

GB 5009.305-2025方法

1.0样品提取

1.1 肉及肉制品、水产品、固态及半固态乳制品(乳粉、发酵乳等)、婴幼儿配方食品

称取1g试样(精确至0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入50μL同位素内标混合使用液,振荡混合后静置30min。加入2mL水,涡旋振荡30s,再加入5mL乙腈涡旋混合。混合液超声提取15min,4 ℃下10000r/min离心10 min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮气缓缓吹至约2mL,加入8mLPBS混匀,待净化。

1.2 蛋、乳及液态乳制品

称取1g试样(精确至0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入50μL同位素内标混合使用液,振荡混合后静置30 min。加入5mL乙腈,涡旋混合后超声提取 15 min,4 ℃ 下 10000r/min 离心10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮气缓缓吹至约2mL,加入8mLPBS混匀,待净化。

1.3 谷物及婴幼儿谷类辅助食品

称取1g试样(精确至0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入50μL同位素内标混合使用液,振荡混合后静置30min。加入10 mL 甲醇-水溶液(80+20),涡旋振荡30s,超声提取15 min,4 ℃下10000r/min离心10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮气缓缓吹至约2mL,加入8mLPBS混匀,待净化。

1.4 蔬菜、水果

称取1g试样(精确至0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入100μL盐酸溶液(10+90)混匀,再加入50μL 同位素内标混合使用液,振荡混合后静置30min。加入5mL乙腈,涡旋振荡30s,超声提取15min,4 ℃10000r/min离心10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮气缓缓吹至约2mL,加入8mLPBS混匀,待净化。

1.5 饮料

称取1g试样(精确至0.01g),置于2mL聚丙烯离心管中,加入50μL同位素内标混合使用液,振荡混合后静置30min。10000r/min离心10min。取上清液至50mL 聚丙烯离心管中,加入10mLPBS溶液混匀,待净化。

 注:澄清试样(如纯净水、矿泉水等)可不离心,直接加入 PBS混匀。

 

2.0试样净化

   2.1 亲和柱活化

        将免疫亲和柱连接于10.0mL注射器下。调节压力使柱子保护溶液以约2mL/min（1滴/秒）流速缓慢通过免疫亲和柱，直至少量空气通过柱体。准确量取5mL 亲和柱活化液（亲和柱产品标配）淋洗亲和柱，流速为1滴/秒，直至少量空气通过柱体。用5.0mL纯水淋洗柱子1次，弃去全部流出液，再用10.0mLpH7.4 PBS溶液淋洗柱子，流速为1滴/秒，待最后2-3mL溶液充满柱子时，停止加压，用塞子堵住底部出液口，待用。

注：为了进一步提高双酚A免疫亲和柱的净化和吸附效果，该亲和柱使用前需要活化处理。活化后的亲和柱请在1小时内使用。 

2.2 亲和柱净化

取1.0步骤的待净化液全部过柱, 流速为1滴/秒，弃去全部流出液, 再用10mL 水淋洗免疫亲和柱，流速为1-2滴/秒，待水滴完后, 用真空泵抽干免疫亲和柱。加入1 mL甲醇洗脱, 流速为1-2滴/秒，收集洗脱液于玻璃氮吹管中, 40 ℃下用氮气缓缓吹干。 准 确 加 入0.40mL 甲醇, 涡旋混合10s,再准确加入0.60 mL 水,涡旋混合后转移至 2 mL 聚丙烯离心管中, 10000r/min下离心5min,取上清液供液相色谱-串联质谱仪测定。

 

注意事项

• 不要随便更改操作说明书中的操作步骤，如需更改请与本公司技术部联系，确认更改是否合理。
• 操作步骤中，样品过柱，淋洗，洗脱时，一定要控制好流速，不能太快，否则会使检测结果偏低。

•  本实验尽量减少使用塑料制品容器，尤其是PC材质塑料用品，实验用水尽量使用放置玻璃器皿中蒸馏。

 

                                             亲和柱配置清单

C/N编号	物品	数量
IAC702-A	双酚A亲和柱	1盒
C3001	PBS磷酸缓冲液固体试剂包  （配制1L）	2 包
	双酚A亲和柱活化剂（50ml/瓶）	3瓶
	说明书和质控报告	各1份

                                            需要准备的设备及试剂

C/N编号	物品
21022	六位泵流操作架（配有1台空气泵，6个10mL针筒）
IAC702-A	双酚A免疫亲和柱（25支/盒）
※	双酚A标准品
31955-C	微纤维滤纸（1.5um，100张/盒）
31240-C	折叠式槽纹滤纸（100张/盒），或中速定性滤纸
36010-C	一次性塑料烧杯(25/包)
34000-C	一次性测试管(250支/包)
36020-C	塑料漏斗(10 个/包)
35016	色谱纯级的甲醇（4升/瓶）
C546150-U	C18 反相色谱柱4.6*150mm（5um）
C546250-U	C18 反相色谱柱4.6*250mm（5um）